2种饲养层对牛iPSCs从始发态向初始态转化的影响

摘要

饲养层细胞对获得多能干细胞(pluripotent stem cells, PSCs)非常重要，小鼠胚胎成纤维细胞(mouse embryonic fibroblasts, MEF)已被广泛用作培养和产生多种胚胎干细胞(embryonic stem cells, ESCs)及诱导PSCs(induced PSCs, iPSCs)的饲养层，但由于种间差异，MEF可能不适于家畜ESCs和iPSCs。研究表明，PSCs可被分为至少2种多能性状态：初始态(naive state)和始发态(primed state)。本室前期用MEF饲养层从牛睾丸支持细胞(sertoli cells, SCs)获得了牛的始发态iPSCs。本研究基于初始态培养液(na6ve medium, NM),比较了MEF饲养层和牛胚胎成纤维细胞(bovine embryonic fibroblasts, BEF)饲养层对牛iPSCs多能性和形态维持及其从始发态向初始态样转化的影响。结果显示，MEF+NM(MNM)和BEF+NM(BNM)均能在3～4 d内将牛iPSCs从始发态转化为初始样状态。克隆分析显示，BNM培养中牛iPSCs的克隆数、碱性磷酸酶活性和转化效率均高于MNM培养中的指标。这些克隆在长期培养中均能表达初始态iPSCs的多能性分子标记。结果表明，采用NM条件，在MEF和BEF饲养层上均可产生牛初始态样iPSCs,但在BEF上转化效率较高。

关键词

牛 / 牛胚胎成纤维细胞 / 诱导多能干细胞 / 小鼠胚胎成纤维细胞 / 初始态 / 始发态