非洲猪瘟病毒CP312R蛋白的真核表达及单克隆抗体制备

摘要

为制备非洲猪瘟病毒(African swine fever virus, ASFV)CP312R蛋白的单克隆抗体，以真核表达ASFV的CP312R蛋白为免疫原免疫BALB/c小鼠制备单克隆抗体，并通过间接免疫荧光法(IFA)对获得的单克隆抗体进行反应性鉴定。结果利用杆状病毒表达系统(baculovirus expression system, BES)构建获得重组转移载体pOET3-CP312R,与杆状病毒基因组flashBAC~(TM) ULTRA共转染Sf9昆虫细胞获得重组杆状病毒AcMNPV-CP312R,且该病毒以胞内可溶形式表达出重组ASFV CP312R蛋白质。通过蛋白质印迹法鉴定显示重组CP312R蛋白可以与ASFV阳性血清发生特异性反应。此外，筛选获得2株针对重组CP312R蛋白的单克隆抗体(McAb),间接ELISA方法鉴定抗体滴度不低于1∶1 024 000。IFA试验检测表明，单克隆抗体与非洲猪瘟抗原发生特异性反应。本研究为非洲猪瘟亚单位疫苗研发及血清学检测方法的建立提供物质储备。

关键词

非洲猪瘟 / CP312R蛋白 / 重组杆状病毒 / 单克隆抗体 / 间接ELISA