猪干扰素α的原核可溶性表达及抗PEDV活性

摘要

旨在利用原核表达系统高效表达具有抗病毒活性的可溶性重组猪干扰素α(soluble recombinant porcine interferon-α,srPoIFN-α)。通过PCR方法扩增姜曲海猪IFNα基因成熟肽序列，将其分别克隆至原核表达载体pCold-Ⅱ、pET22b、pET30a和pET30a-ELP中并在大肠杆菌中进行表达；通过Western blot结合Image J软件或BCA定量分析不同表达载体、密码子偏好优化、培养基类别、纯化方式等因素对猪干扰素α基因在大肠杆菌中可溶性表达的影响，鉴定提高srPoIFN-α表达的有利因素；利用VSV-GFP和PEDV检测srPoIFN-α的抗病毒活性。结果显示，原核表达载体pET30a、密码子优化、HB-PET自诱导培养基和磁珠纯化均能显著提高srPoIFN-α产量(P<0.001);srPoIFN-α有效抑制VSV-GFP复制的稀释倍数为2~(-8.1),与重组人干扰素α2b标准品的比活为1.71×10~(8 )IU/g,有效抑制PEDV复制的稀释倍数为2~(-10.29),抗PEDV活性为2.72 IU,表明srPoIFN-α具有良好抗PEDV活性。这些结果为进一步开发可溶性IFNα药物制剂提供参考。

关键词

原核表达 / 猪可溶性重组干扰素α / 抗病毒活性 / PEDV