猪流感病毒TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法的建立

摘要

参照GenBank登录的猪流感病毒(swine influenza virus, SIV)基质蛋白(matrix protein, M)基因保守序列设计1对特异性引物和1个TaqMan探针，构建重组质粒作为绝对定量模板，通过优化反应体系及条件建立了检测SIV的荧光定量RT-PCR方法，测试了该方法的特异性、灵敏度及重复性。结果显示，建立的方法与猪瘟病毒、猪蓝耳病毒、猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪圆环病毒2型、猪伪狂犬病病毒、猪细小病毒和猪乙型脑炎病毒等不存在交叉反应，特异性强；最低检测限度为1.0拷贝/μL,比普通RT-PCR方法灵敏10倍；组内和组间重复性试验的变异系数分别在2.2%和1.9%以下，重复性较好；应用该方法对220份临床疑似猪流感样品进行检测，荧光定量RT-PCR方法和普通RT-PCR检测率分别为2.7%和1.8%,阳性符合率为100%。结果表明，建立的TaqMan荧光定量RT-PCR方法特异性强、灵敏度高、重复性好，可快速检测样品中的各种SIV,从而更好地诊断和监测猪流感。

关键词

猪流感病毒 / TaqMan探针 / 荧光定量RT-PCR方法