鸡滑液囊支原体LP78蛋白重组腺病毒载体的构建及雏鸡免疫原性评价

摘要

选取鸡滑液囊支原体(Mycoplasma synoviae,MS)LP78蛋白，将LP78基因克隆至pMD19-T载体上后，采用腺病毒Ad-Max系统将pMD-LP78重组克隆质粒连接到穿梭载体pDC316-mCMV-EGFP上构建重组穿梭质粒pDC-LP78,将pDC-LP78重组穿梭质粒与腺病毒大骨架pBHGlox(delta)E1、3cre共转染HEK 293A细胞包装成重组腺病毒pBH-LP78,RT-PCR及Western blot鉴定HEK 293A细胞系包装的重组腺病毒pBH-LP78。测定病毒滴度；再通过腿部肌肉免疫接种构建的重组腺病毒pBH-LP78,并用ELISA方法检测免疫鸡血清中的特异性抗体和细胞因子(IL-2、IFN-γ、IL-4和IL-6)的分泌情况。PCR、双酶切鉴定和测序结果显示，成功构建了重组克隆质粒pMD-LP78和重组穿梭质粒pDC-LP78;RT-PCR及Western blot结果显示，目的基因在HEK 293A细胞中稳定表达；ELISA结果显示，血清中LP78特异性抗体和细胞因子(IL-2、IFN-γ、IL-4和IL-6)的分泌量极显著升高(P<0.01),表明pBH-LP78重组腺病毒能刺激鸡机体产生体液和细胞免疫应答。结果表明，成功构建了MS重组腺病毒载体疫苗pBH-LP78,其可有效引起鸡机体产生体液和细胞免疫应答，为MS新型重组腺病毒载体疫苗的研发奠定了基础。

关键词

鸡滑液囊支原体 / LP78蛋白 / 重组腺病毒