乙型流感病毒TaqMan荧光定量PCR分型检测方法的建立及初步应用

摘要

通过比对GISAID登录的乙型流感病毒Victoria谱系、Yamagata谱系HA基因序列，选择保守区域设计并合成1对引物及2条荧光探针，以实验室保存的乙型流感毒株RNA为模板分别扩增Victoria谱系和Yamagata谱系HA基因片段，构建重组质粒标准品pUC57-Vic和pUC57-Yama,经PCR及测序鉴定正确后作为质粒标准品，初步建立乙型流感病毒的TaqMan荧光定量PCR(real-time quantitative reverse transcription PCR,qRT-PCR)分型检测方法。结果显示，该方法可以特异的鉴别检测乙型流感Victoria谱系、Yamagata谱系病毒RNA,对甲型流感病毒、EB病毒、腺病毒等RNA/DNA的检测结果均为阴性；对重组质粒标准品的检测限分别为333、2 940拷贝/μL;批内与批间的重复性试验的变异系数均小于2%,表明所建立的检测方法特异性良好、灵敏度较高、重复性好；利用该方法与常规反转录PCR(RT-PCR)方法对10份流感样病例咽拭子进行检测，检测结果一致(3/10)。结果表明，本试验建立的乙型流感病毒TaqMan荧光定量PCR分型检测方法能够检测乙型流感病毒，为乙型流感病毒Victoria谱系及Yamagata谱系的鉴别提供更加快速准确的定量检测手段。

关键词

乙型流感病毒 / TaqMan荧光定量PCR / 血凝素