BCSP31蛋白双抗夹心ELISA定量方法的建立及应用

摘要

通过原核表达系统制备、纯化布鲁菌嵌合病毒样颗粒疫苗核心组分BCSP31蛋白，并将其作为免疫原及标准品分别免疫新西兰大白兔(1 mg/只)和BALB/c鼠(200μg/只)制备兔源捕获多克隆抗体和鼠源检测多克隆抗体，对双抗夹心ELISA方法的捕获抗体和检测抗体最佳稀释倍数、封闭液种类及封闭条件、酶标二抗工作条件等参数进行优化，结果显示兔多克隆抗体最佳包被浓度和鼠多克隆抗体最佳稀释倍数均为1∶1 600、3%脱脂奶粉封闭1 h、酶标二抗最佳稀释倍数为1∶4 000、酶标二抗孵育时间1 h、显色时间为15 min的条件下建立的双抗夹心ELISA方法效果最好。按照上述最佳反应条件对布鲁菌嵌合病毒样颗粒疫苗(BCSP31-cVLPs)核心抗原成分BCSP31蛋白进行定量检测，并对其敏感性、特异性、重复性等性能进行评价，结果显示1μL布鲁菌嵌合病毒样颗粒中的BCSP31含量约占总蛋白含量的14.187%;将布鲁菌嵌合病毒样颗粒稀释640倍后，P/N值仍大于2.1,有较高的敏感性；与FAdV、IBDV、NDV、AIV等其他病毒样颗粒均无交叉反应，特异性高；批间和批内变异系数均在10%以下，重复性良好。该方法的建立为推进布鲁菌嵌合病毒样颗粒疫苗的质量控制标准建立及商品化奠定了基础。

关键词

布鲁菌病嵌合病毒样颗粒 / BCSP31蛋白 / 双抗夹心ELISA方法 / 参数优化 / 应用