脂滴相关蛋白Rab18对猪血凝性脑脊髓炎病毒复殖和转运的影响

摘要

通过分子克隆技术、RNAi技术及共聚焦显微镜技术检测Rab18蛋白对猪血凝性脑脊髓炎病毒(porcine haemagglutinating encephalomyelitis virus, PHEV)复殖和转运的影响。PCR技术扩增目的基因Rab18,将其插入pCMV-C-EGFP质粒中，构建野生型Rab18-EGFP过表达质粒；利用点突变盒子定点突变Rab18-EGFP,构建活化型Rab18和失活型Rab18过表达质粒。将成功构建的Rab18过表达质粒或者Rab18 siRNA转染小鼠神经瘤母细胞(neuro-2a cells)后接种PHEV,通过Western blot和qPCR检测PHEV蛋白和基因表达。结果显示，活化型Rab18促进PHEV的增殖和释放，失活型Rab18抑制PHEV的增殖；敲低Rab18后PHEV增殖及病毒的胞外释放受到抑制；利用共聚焦显微技术观察到PHEV、Rab18和LDs在细胞质中有明显共定位，且PHEV感染后Rab18与脂肪-甘油三酯-脂肪酶(ATGL)的共定位增强。结果表明，Rab18通过脂质代谢中LDs形成相关途径调控PHEV复殖与转运。

关键词

猪血凝性脑脊髓病毒 / Rab18 / 脂滴 / 胞内运输