血清1型FAdV TaqMan探针荧光定量PCR方法的建立及应用

摘要

为特异性地检测家禽中血清1型禽腺病毒(fowl adenovirus, FAdV)的感染，本研究以血清1型FAdV保守的52K基因为模板设计引物和探针，通过矩阵法优化后建立了针对该病毒的TaqMan探针实时荧光定量PCR方法，并用该方法检测1日龄SPF鸡攻毒后咽、肛拭子排毒量及组织病毒载量。结果显示，该方法具有良好的特异性、敏感性和重复性，只能检测出血清1型FAdV,对其他血清型FAdV和其他禽类病毒均无阳性扩增；最低检测限度低至10拷贝/μL;组间和组内离散度均小于2%;标准曲线为y=-3.836x+41.791,相关系数R~2=0.996,具有良好的线性关系；对SPF鸡攻毒结果显示，在攻毒后第1～14日的咽、肛拭子均可检测到血清1型FAdV,在攻毒后第8日的肝脏、肾脏、肌胃、回肠中也可检测到病毒，而腺胃和盲肠中未检出病毒。本研究为血清1型FAdV的定量检测提供了方法。

关键词

血清1型FAdV / TaqMan探针 / 荧光定量PCR