H10亚型禽流感病毒TaqMan探针实时荧光定量PCR检测方法的建立

摘要

从NCBI和GISAID数据库中下载H10亚型禽流感病毒的HA基因序列信息，与本实验室保存毒株的序列进行比对、分析、筛选，选择其共同保守区域设计荧光引物和探针，优化反应体系和条件，并验证该方法的特异性、敏感性和重复性。结果显示，该方法具有高度特异性，与其他几种禽源性病毒均无交叉反应；敏感性可达到1.7×10~2拷贝/μL,比普通RT-PCR敏感10倍；批内和批间重复的变异系数(C_v)均小于1.4%,稳定性较好；分别使用鸡胚接种病毒分离法、本研究建立的TaqMan探针实时荧光定量PCR和普通RT-PCR检测鸡感染试验的拭子和组织样品，结果显示病毒分离法与本研究建立的实时荧光定量PCR方法的总符合率为94.44%,而与普通RT-PCR方法的总符合率为90.74%,实时荧光定量PCR的阳性检出率比RT-PCR更高。结果表明，建立的TaqMan探针实时荧光定量PCR检测方法具有较好的特异性、敏感性和稳定性，有助于H10亚型禽流感病毒的临床检测和监测，对其防控具有一定意义。

关键词

H10亚型禽流感病毒 / TaqMan探针 / 实时荧光定量PCR / HA基因