亨德拉病毒N和G蛋白单克隆抗体的制备及其鉴定

摘要

为制备抗亨德拉病毒(Hendra virus, HeV)特异性单克隆抗体，本试验用原核表达纯化的HeV-N和HeV-G蛋白免疫BALB/c小鼠，取其脾细胞与骨髓瘤SP2/0细胞进行融合，通过间接ELISA方法筛选抗体阳性杂交瘤细胞，经过筛选和3次亚克隆，获得5株阳性杂交瘤细胞株，其中针对HeV-N蛋白的有3株，命名为2H6、3C2、3G6;针对HeV-G蛋白的有2株，命名为5B8、2A4;利用ELISA方法检测单抗效价2H6与2A4均≥1∶512 000,3G6和5B8效价≥1∶256 000,3C2效价≥1∶128 000;Western blot和间接免疫荧光试验结果显示5株单抗均能与对应抗原发生结合反应；稳定性试验显示细胞传至15代时仍能稳定分泌抗体，稳定性良好；单克隆抗体亚型鉴定结果显示2H6、3C2、3G6均为IgG2b, 5B8和2A4均为IgG1。本试验HeV-N和HeV-G蛋白特异性单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立，为HeV新型诊断方法和诊断试剂的开发奠定前期基础。

关键词

亨德拉病毒 / 单克隆抗体 / N蛋白 / G蛋白