猪δ冠状病毒RBD的可溶性表达、纯化及小鼠抗血清制备

摘要

为获得猪δ冠状病毒(PDCoV)S蛋白受体结合区(RBD)的可溶性蛋白及特异性多克隆抗体血清，本研究将PDCoV流行株S蛋白(GenBank:QAA06990.1)的RBD序列添加信号肽、纯化标签与酶切位点，命名为PDCoV-RBD(简称PDR),对其进行密码子优化后合成并克隆至pcDNA3.1(+)真核表达载体，构建重组质粒pcDNA3.1-PDR。将重组质粒转染至Expi293F细胞进行表达，并利用SDS-PAGE与Western blot进行鉴定；通过Strep-Tactin XT亲和层析纯化目的蛋白，薄层扫描分析蛋白纯度，并以纯化后的PDR蛋白免疫小鼠，制备抗PDR蛋白的特异性多克隆抗体血清，通过间接ELISA测定效价，PDCoV病毒感染细胞后，通过Western blot检测S蛋白与血清的特异性结合效果。结果显示，PDR在Expi293F细胞中获得可溶性表达，纯化得到的目的蛋白大小正确，纯度大于98%;用其免疫小鼠制备的抗血清能特异性结合病毒中天然的S蛋白。本研究获得的PDR蛋白及其小鼠抗血清可为PDCoV的诊断检测与疫苗研制提供必要的物质基础。

关键词

猪δ冠状病毒 / 受体结合区蛋白 / 表达 / 纯化 / 抗血清制备