稳定表达PDCoV-S和RBD蛋白的293T细胞系构建与免疫原性评价

摘要

为构建稳定表达猪δ冠状病毒(PDCoV)S和RBD蛋白的293T细胞系，获得PDCoV S和RBD蛋白。本研究将优化合成的PDCoV S蛋白全长基因及其RBD的表达质粒进行双酶切鉴定，将重组质粒pLV-S-Puro、pLV-RBD-Puro、psPRX2、pMD2.G同时转染293T细胞中进行慢病毒包装，收集上清感染293T细胞，经嘌呤霉素初筛得到的多细胞克隆，进一步通过终点稀释法筛选获得稳定表达PDCoV S和RBD蛋白的单克隆293T细胞系，通过Western blot检测蛋白表达，用纯化的PDCoV S和RBD蛋白分别免疫BALB/c小鼠，对重组蛋白进行免疫原性检测。结果表明，稳定表达PDCoV S和RBD蛋白的293T细胞系构建成功，获得了重组慢病毒，纯化PDCoV S和RBD重组蛋白均可以诱导小鼠产生较高的IgG抗体(S:1.2;RBD:0.9),中和抗体水平分别达1∶128和1∶64。本研究构建的293T细胞系能稳定表达PDCoV S和RBD蛋白，为进一步研制PDCoV亚单位疫苗奠定了基础。

关键词

293T细胞系 / PDCoV / 慢病毒 / 稳定表达