Sirt1在氧化应激所致奶牛乳腺上皮细胞损伤中的保护作用

摘要

旨在初步阐明Sirt1在奶牛乳腺氧化应激中对紧密连接的影响及机制。以奶牛乳腺上皮细胞(MAC-T)为研究对象，使用H_2O_2诱导细胞氧化应激构建细胞模型，添加Sirt1激动剂SRT 2104,使用流式细胞术检测细胞中活性氧的含量；通过RT-PCR检测Sirt1基因的转录水平；用Western blot检测Sirt1、ZO-1、Occludin、Cludin 3、p38MAPK、JNK、MLCK、MLC2的蛋白表达水平；通过细胞免疫荧光检测ZO-1、Occludin、Cludin 3的表达；同时使用试剂盒检测细胞的抗氧化能力。结果表明，H_2O_2刺激会显著抑制MAC-T细胞活性并抑制Sirt1基因的表达以及Sirt1、ZO-1、Occludin和Cludin 3的蛋白表达；SRT 2104可以有效改善H_2O_2刺激导致的ZO-1、Occludin和Cludin 3的蛋白表达下降；同时SRT 2104会增强细胞的抗氧化能力并抑制p38MAPK、JNK、MLCK蛋白的表达和MLC2的磷酸化。以上结果表明Sirt1通过抑制p38MAPK/JNK信号传导途径增强细胞的抗氧化能力和紧密连接蛋白表达。

关键词

Sirt1 / 奶牛乳腺上皮细胞 / 紧密连接 / p38MAPK / JNK