精氨酸对热应激诱导奶牛中性粒细胞凋亡的影响

摘要

旨在研究热应激对奶牛中性粒细胞(polymorphonuclear granulocyte, PMN)凋亡的影响，并探究精氨酸(L-arginine,L-Arg)是否对热应激诱导下的奶牛PMN具有保护作用。利用从健康奶牛分离培养的PMN构建体外试验模型，分为对照组(Con组，37℃)和热应激组(HS组，42℃培养0.0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0 h),通过CCK-8法检测细胞活性，确定最适热处理时间为2.5 h;将从健康奶牛分离得到的PMN与不同浓度(2、4、6、8、10 mmol/L)L-Arg预孵育30 min后，再置于42℃下培养2.5 h,利用CCK-8法检测细胞活性，最终筛选出L-Arg的最佳使用浓度为4 mmol/L。通过Western blot检测热休克蛋白70(HSP70)和凋亡关键蛋白c-CASP 3的蛋白丰度，流式细胞术检测PMN凋亡率。结果显示，相对于Con组，HS组PMN HSP70蛋白的丰度显著升高(P<0.01),c-CASP 3与CASP 3的蛋白丰度比显著升高(P<0.01),同时PMN凋亡率显著升高(P<0.01);而4 mmol/L的L-Arg预孵育可显著缓解热应激对奶牛PMN的c-CASP 3与CASP 3的蛋白丰度(P<0.01)和凋亡(P<0.05)的影响。这些结果表明，热应激能引起奶牛PMN凋亡，而L-Arg能缓解热应激对奶牛PMN的促凋亡作用。

关键词

精氨酸 / 奶牛 / 热应激 / 中性粒细胞 / 凋亡