白藜芦醇缓解NEFA诱导的奶牛乳腺上皮细胞的周期阻滞和凋亡

摘要

围产期奶牛能量负平衡(negative energy balance, NEB)可引起高非酯化脂肪酸(non-esterified fatty acids, NEFA)血症。大量NEFA被乳腺组织吸收，可诱发细胞凋亡。白藜芦醇(resveratrol, RES)是一种非黄酮类多酚有机化合物，具有抗炎抗凋亡等作用。目前，尚不清楚RES对高NEFA处理的乳腺上皮细胞(MAC-T)的周期阻滞和凋亡的影响。因此本研究主要探讨NEFA对MAC-T细胞周期阻滞和凋亡的影响以及RES是否能改善高浓度NEFA对MAC-T的病理作用。添加不同浓度的NEFA处理MAC-T,利用CCK-8细胞活力检测试剂盒检测细胞活力，通过Western blot检测细胞凋亡相关分子Caspase-3、Bcl-2、Bax和细胞周期调节因子Cyclin D1的蛋白表达水平，采用qRT-PCR法检测细胞凋亡相关因子Caspase-3、Bcl-2、Bax的mRNA转录水平，利用流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡。结果显示，NEFA剂量依赖性地诱导MAC-T细胞凋亡，降低细胞活力，阻滞细胞周期。高NEFA显著增加Bax、Caspase-3的mRNA转录水平和Bax/Bcl-2、cleaved-Caspase-3/Caspase-3蛋白表达，降低细胞周期调节因子Cyclin D1的蛋白表达及Bcl-2 mRNA转录水平。此外，单独添加最高浓度80μmol/L的RES对MAC-T细胞活力无影响，且不会引起细胞凋亡。用高浓度NEFA处理细胞并分别添加10、20、40μmol/L RES,RES的添加可以缓解NEFA导致的Cyclin D1蛋白水平下降，降低Bax/Bcl-2和Cleaved-Caspase-3/caspase-3蛋白水平。同时，RES的添加还可以降低G2/M和S期细胞百分比和细胞凋亡。结果表明，NEFA可以引起细胞周期阻滞和细胞凋亡，RES能缓解NEFA诱导的MAC-T细胞周期阻滞和细胞凋亡。

关键词

白藜芦醇 / 乳腺上皮细胞 / 非酯化脂肪酸 / 细胞周期 / 细胞凋亡