H9N2亚型AIV NP蛋白的原核表达及其免疫效果

摘要

旨在探讨H9亚型禽流感病毒(avian influenza virus, AIV)NP蛋白对小鼠的免疫效果，为研制AIV疫苗奠定基础。试验将H9N2亚型病毒NP基因的扩增产物连接到pET-32a表达载体中，构建重组质粒pET-32a-NP,并将其转入大肠杆菌BL21(DE3)细胞，IPTG诱导后，通过SDS-PAGE和Western blot验证蛋白表达，用NP重组蛋白免疫小鼠，测定小鼠血清中IgG抗体和脾细胞培养上清多细胞因子分泌情况评价其免疫效果。结果显示：NP基因编码区序列全长1 497 bp, NP重组蛋白以可溶性和不可溶性蛋白两种形式存在，Western blot结果可见特异性条带。免疫小鼠后血清产生IgG结合抗体，抗体效价为1∶40 000,与对照组相比，IL-2、IL-5、IL-13分泌量极显著提高(P<0.001),IL-6分泌量显著提高。IL-4和IL-12 p70分泌量与对照组相比升高，却没有显著性差异。而免疫组与对照组相比IL-1β、IL-18、GM-CMF、TNF-α、IFN-γ分泌量被抑制，但差异不显著(P>0.05)。结果表明，NP重组蛋白是一种良好的免疫原，为流感疫苗的深入研究奠定了基础。

关键词

H9N2亚型禽流感 / NP蛋白 / 原核表达 / 细胞因子