Ⅱ型登革病毒铁蛋白纳米颗粒蛋白的真核表达、纯化及免疫效果评价

摘要

将Ⅱ型登革病毒E蛋白呈递在幽门螺旋杆菌铁蛋白上，构建一种新型登革纳米颗粒候选疫苗，评价疫苗的免疫学指标，旨在为登革疫苗研发提供新思路。经优化合成E-Ferritin-pcDNA3.1重组质粒后转染HEK-293F细胞，对重组蛋白进行表达、鉴定、纯化和构型分析后使用E-Ferritin纳米颗粒疫苗于0、14、28 d后肢肌肉注射免疫小鼠。使用ELISA、中和试验、流式细胞术和淋巴细胞增殖试验检测免疫小鼠的特异性抗体水平、中和抗体水平、脾细胞中CD3~+、CD4~+和CD8~+ T淋巴细胞含量和特异性刺激后脾淋巴细胞的增殖情况。结果显示，胞内表达出大小约69 kDa的目的蛋白，条带单一，纯化质量浓度0.407 g/L,纯度达到82.32%。透射电镜观察到E-Ferritin蛋白可重组成粒径约50 nm的颗粒结构。小鼠免疫试验结果表明，E-Ferritin蛋白具有良好的免疫原性，一免后42 d血清中特异性抗体效价平均值为1∶92 160,主要表达的抗体亚类为IgG1,倾向于Th2型免疫应答，中和抗体效价达到1∶130。流式细胞术结果表明，重组蛋白E-Ferritin作为免疫原可以诱导机体产生更高水平的CD4~+、CD8~+T淋巴细胞免疫应答。淋巴细胞增殖试验中疫苗组特异性刺激水平显著高于非特异性刺激组。综上得出结论，本研究构建的登革病毒包膜蛋白铁蛋白纳米颗粒疫苗具有良好的免疫原性，可为新型登革候选疫苗研究提供参考。

关键词

登革病毒 / 铁蛋白 / 真核表达 / 纳米颗粒 / 免疫原性