鸭星状病毒1型SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR检测方法的建立及其在病毒分离鉴定中的应用

摘要

为实现鸭星状病毒1型(Duck astrovirus type 1,DAstV-1)的快速检测，本试验针对DAstV-1(WF1202株)保守区域设计特异性引物，建立了基于染料SYBR GreenⅠ的实时荧光定量PCR(qPCR)方法，利用所建方法对临床样本进行检测，并将其应用于阳性样本病毒的分离和鉴定。结果表明所建qPCR检测方法的检测下限为4.64×10~3拷贝/μL,高于普通RT-PCR方法10倍；对禽类其他常见病原均为阴性，特异性良好；批内、批间变异系数(C_v)分别为0.85%～2.85%和0.21%～2.94%,均低于3.00%,表明其重复性良好。利用该方法对2020-2022年间10省份不同鸭场的35份组织病料进行检测，阳性率为25.71%(9/35),与普通RT-PCR检测结果的符合率为94.29%。任取1份阳性病料接种健康鸭胚进行病毒的分离，收集尿囊液利用所建qPCR方法进行检测，确定为阳性后接种1日龄健康雏鸭进行动物回归试验，感染雏鸭呈现一过性发病但未出现死亡，qPCR检测DAstV-1均为阳性，剖检可见肝脏有轻微出血，病理组织学观察发现肝细胞空泡变性，说明所分离的DAstV-1毒株致病性较弱。综上，本试验成功建立了DAstV-1的荧光定量PCR检测方法，可为DAstV-1的临床诊断、分离鉴定及分子流行病学监测等提供技术支撑。

关键词

鸭星状病毒1型 / 分离鉴定 / 诊断方法 / SYBR GreenⅠ染料