禽呼肠孤病毒σA蛋白单克隆抗体的制备及夹心ELISA检测方法的建立

摘要

旨在制备禽呼肠孤病毒（ARV）σA蛋白单克隆抗体及建立一种夹心ELISA方法检测ARV病原。以原核表达ARVσA蛋白作为抗原，免疫BALB/c小鼠，筛选稳定的杂交瘤细胞株制备单克隆抗体，建立基于单克隆抗体的σA-夹心ELISA检测方法，并进行敏感性、特异性、重复性和准确性检验。结果显示，成功构建了重组质粒pET-32a-σA,并在大肠杆菌中良好表达。通过杂交瘤细胞筛选，获得了2株能稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株，分别命名为6B3和8E11,2株杂交瘤细胞分泌的单克隆抗体均能与天然ARV反应。选择其中1株6B3分泌的单克隆抗体作为捕获抗体，ARV阳性鸡多克隆抗体作为检测抗体，通过优化反应条件，建立了检测ARV的σA-夹心ELISA方法。特异性检测显示该法只检出ARV病原，没有检出其他常见鸡病病原；敏感性试验显示其能检出7.72×10～2 EID₅₀/mL的ARV;重复性试验显示批内和批间试验的变异系数（Cv）均小于5.0%,重复性好。用σA-夹心ELISA方法与PCR方法同时对30份样品进行检测，两者检测结果相符。结果表明成功建立基于ARVσA蛋白单克隆抗体的夹心ELISA方法用于ARV的鉴别检测，为准确快速检测ARV提供技术手段。

关键词

禽呼肠孤病毒 / σA蛋白 / 单克隆抗体 / 夹心ELISA