血清11型禽腺病毒Fiber蛋白的原核表达及多克隆抗体的制备

刘帅峰; 马一凡; 王相芹; 郭笑然; 刘小娜; 雷白时; 袁万哲; 陈福星; 赵款

doi:10.16303/j.cnki.1005-4545.2024.07.07

中国兽医学报 ›› 2024, Vol. 44 ›› Issue (07) : 1387 -1393. DOI: 10.16303/j.cnki.1005-4545.2024.07.07

血清11型禽腺病毒Fiber蛋白的原核表达及多克隆抗体的制备

刘帅峰, 马一凡, 王相芹, 郭笑然, 刘小娜, 雷白时, 袁万哲, 陈福星, 赵款

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摘要

为获得血清11型禽腺病毒(fowl adenovirus serotype 11,FAdV-11)纤突(Fiber)蛋白的多克隆抗体，并研究其对不同血清型FAdV Fiber蛋白的交叉反应特性，本研究利用同源重组技术将FAdV-11 Fiber蛋白的编码基因克隆至原核表达载体pET-32a上，转化至BL21 (DE3)感受态细胞，经诱导表达后，将纯化的重组蛋白作为免疫原免疫家兔制备多克隆抗体，并通过Western blot和IFA鉴定该多克隆抗体与不同血清型FAdV Fiber蛋白的交叉反应性。结果表明，His-FAdV-11-Fiber重组蛋白主要以包涵体形式表达且表达良好，Western blot和IFA结果均显示，制备的多克隆抗体能与FAdV-8a、FAdV-8b和FAdV-11的Fiber蛋白反应，而不能与FAdV-4的2个Fiber (Fiber 1和Fiber 2)蛋白反应。综上所述，本研究成功制备兔抗FAdV-11 Fiber的多克隆抗体，并验证其能特异性识别FAdV-8a、FAdV-8b和FAdV-11的Fiber蛋白，为进一步建立FAdV-11的血清学鉴别诊断方法奠定了基础。