边缘革蜱AQPs重组蛋白的表达及抗蜱效果

摘要

对边缘革蜱(Dermacentor marginatus)水通道蛋白(aquaporin, AQP)rDmAQP1、rDmAQP2和rDmAQP3纯化后免疫家兔，采血，进行Western blot和ELISA试验，第3次免疫2周后进行抗蜱试验。利用SDS-PAGE凝胶电泳筛选出rDmAQP1、rDmAQP2和rDmAQP3的最优表达条件，经HisSep Ni-NTA 6FF纯化柱将3种重组蛋白纯化，家兔分4组，每组3只家兔，对照组1组，免疫组3组。纯化的3种重组蛋白分别单独免疫3组家兔，在0、14、21 d分别进行1次免疫，每隔7 d采血1次，制备多克隆抗体，Western blot检测其反应原性，用ELISA检测其抗体效价，待抗体效价升高后开展攻蜱试验。结果显示，rDmAQP1的最优表达条件是IPTG浓度为1.0 mmol/L、37℃诱导8 h; rDmAQP2的最优表达条件是IPTG浓度为1.0 mmol/L、37℃诱导7 h; rDmAQP3的最优表达条件是IPTG浓度为1.0 mmol/L、37℃条件下诱导5 h。Western blot结果显示rDmAQP1、rDmAQP2和rDmAQP3都具有一定的反应原性。ELISA结果显示rDmAQP1、rDmAQP2和rDmAQP3免疫家兔的抗体效价分别为：1∶409 600、1∶512 00和1∶409 600,rDmAQP1蛋白免疫后总的抗蜱效果为79.74%,对边缘革蜱的平均饱血蜱质量、平均卵质量及平均卵孵化率的抑制率分别为9.43%、25.17%和63.81%;rDmAQP2蛋白免疫后总的抗蜱效果为78.78%,对边缘革蜱的平均饱血蜱质量、平均卵质量及平均卵孵化率的抑制率分别为8.30%、20.14%和68.26%;rDmAQP3蛋白免疫后总的抗蜱效果为87.91%,对边缘革蜱的平均饱血蜱质量、平均卵质量及平均卵孵化率的抑制率分别为3.23%、22.47%和80.50%。本研究通过血清学试验及抗蜱试验，发现rDmAQP1、rDmAQP2和rDmAQP3都具有抗蜱疫苗候选抗原潜力，其中rDmAQP3的免疫效果最佳，为rDmAQP1、rDmAQP2和rDmAQP3功能研究奠定了基础。

关键词

边缘革蜱 / 水通道蛋白 / 多克隆抗体的制备 / 抗蜱效果评价