猫TNF-α蛋白的原核表达及阻断活性单克隆抗体的制备

摘要

为制备针对猫TNF-α的具有阻断活性的单克隆抗体，本研究基于可溶性猫TNF-α(sTNFα)基因成功构建、表达及纯化了重组质粒pET-28a-sTNFα,并进一步对重组蛋白诱导表达的条件进行摸索和优化，鉴定其生物活性；其次将猫TNF-α重组蛋白作为免疫原进行小鼠免疫、细胞融合、阻断活性杂交瘤细胞的筛选和腹水制备，并对获得的单克隆抗体进行鉴定。结果显示，成功构建了pET-28a-sTNFα质粒并通过大肠杆菌系统表达出具有生物活性的猫TNF-α重组蛋白，相对分子质量为34 kDa,半数细胞活性抑制质量浓度为1.22μg/L;成功筛选出3株具有阻断活性的单克隆抗体(A6-B7-9、H5-E2-94和C8-A10-100),Western blot检测显示3株单抗均能与TNF-α特异性结合，效价可达1∶512 000,3株单抗在质量浓度为100 mg/L时，对TNF-α的拮抗效果最强。本研究筛选了猫TNF-α的阻断活性抗体，以期为由猫TNF-α介导的相关疾病的防治提供新型的安全的有效的候选药物。

关键词

肿瘤坏死因子-α / 单克隆抗体 / 阻断活性 / 重组蛋白表达 / 猫