奶牛骨髓源单核巨噬细胞诱导培养方法建立鉴定及应用

摘要

为了建立奶牛骨髓源巨噬细胞的分离培养与鉴定方法，选用3种不同的培养基（RPMI-1640、DMEM、DMEM/F12）分别添加20%胎牛血清（FBS）、2.4%青-链霉素、1.2%谷氨酰胺（Gln）、M-CSF（20μg/L）将奶牛骨髓中提取出的单核细胞诱导为巨噬细胞，再通过加入脂多糖（Lipolyaccharide, LPS）将诱导出的M0型巨噬细胞极化为M1型巨噬细胞，光学显微镜在第1、4、7天观察巨噬细胞形态，比较3种培养基对分化巨噬细胞的差异。同时探究了前列腺素D₂（Prostaglandin D₂,PGD₂）-DP₂受体途径对大肠杆菌（Escherichia coli）诱导细胞因子（IL-6、TNF-α）分泌及巨噬细胞吞噬功能的影响。结果显示，RPMI-1640培养基中培养的细胞形态变化最为明显，且数量较多。并能够检测到大量的单核巨噬细胞特征性标志物（M0标志物：CD11b、CD14;M1标志物：CD11b、CD80）的表达，M0和M1型巨噬细胞纯度分别为79.9%和93.5%。与空白对照组相比，E.coli感染组COX-2和H-PGDS基因表达显著升高；PGD₂分泌量也显著上升（P<0.000 1）。DP₂受体抑制剂（CAY10471、CAY10595）能够显著抑制E.coli诱导促炎性细胞因子（IL-6、TNF-α）的分泌和显著增强巨噬细胞对E.coli的杀伤作用。结果表明，诱导的细胞具有巨噬细胞特有的形态学特征和免疫表型；E.coli可诱导巨噬细胞PGD₂的产生，PGD₂-DP₂途径对E.coli感染的巨噬细胞细胞因子的分泌具有一定的调控作用。

关键词

奶牛 / 骨髓源巨噬细胞 / 分离培养鉴定 / PGD₂