检测寨卡病毒核酸的RT-LAMP可视化方法的建立

摘要

为建立简单、便捷、灵敏、特异的寨卡病毒(Zika virus, ZIKV)快速检测方法，本研究通过对不同时间、不同地区分离的ZIKV全基因组序列进行分析，筛选ZIKV NS5基因保守区为靶标，同时设计特异性引物及探针，结合RT-LAMP恒温扩增技术和免疫层析技术，成功构建ZIKV反转录环介导等温扩增核酸可视化(RT-LAMP-VF)检测方法。结果显示，该方法具有良好的特异性和敏感性，当内、外、环引物比为FIP∶LF∶F3=4∶2∶1时，在61℃条件下恒温扩增45 min,可特异性检测到10～2 copies/μL的RNA标准品以及2.15 pfu的ZIKV,且与其他黄病毒(日本乙型脑炎病毒、猪瘟病毒)等无交叉反应。血液组织中的其他RNA不影响RT-LAMP-VF的敏感性和特异性，表明该方法可用于临床样本ZIKV的检测。本研究建立的ZIKV RT-LAMP-VF检测方法操作简单、不需要特殊仪器设备，尤其适用于基层单位ZIKV的现场快速检测，为ZIKV病的现场快速检测和预警预报体系的建立提供技术支持与物质保障。

关键词

寨卡病毒 / 环介导等温扩增 / 免疫层析试纸条 / 核酸可视化检测