植物乳杆菌表达重组新冠病毒M抗原表位及免疫原性分析

摘要

新型冠状病毒(SARS-CoV-2)是引起新冠肺炎的病原体，其变异快、传播强，导致疫情广泛流行，以疫苗接种为主要防控措施。尽管已有大量新冠肽表位疫苗和黏膜型疫苗的研究，但靶向黏膜的肽表位疫苗和其功能评价的研究鲜有报道。本研究以IEDB数据库预测SARS-CoV-2结构蛋白M肽表位作为抗原靶点，设计含3050及1229信号肽和DCpep优化的MS-3S基因，插入MS2噬菌体衣壳蛋白中，通过PCR和无缝克隆技术构建表达质粒pSIP:MS-3S,转化到植物乳杆菌LP18中获得重组菌LP18:MS-3S。通过对诱导时间、诱导剂质量浓度、转速和初始pH值等表达条件进行优化及鼻内免疫实验，验证重组菌免疫效果。结果显示，获得出916 bp修饰和优化的目的基因MS-3S,并成功构建重组菌LP18:MS-3S,经Western blot、流式细胞术、免疫荧光等检测方法验证，获得重组蛋白表达的最佳条件：诱导时间为4 h,诱导肽质量浓度为100μg/L,培养基初始pH值为7.0,转速为100 r/min。通过ELISA试验验证，在小鼠的血清、肺泡灌洗液和粪便稀释液中，检测出抗肽表位的特异性抗体。本研究成功构建了1株表达新冠M蛋白肽表位抗原的重组菌，并且可诱导机体产生体液和黏膜免疫，为新冠黏膜免疫候选疫苗的研制奠定了基础。

关键词

SARS-CoV-2 / M蛋白 / 肽表位 / 植物乳杆菌 / 鼻内免疫

基金资助

国家重点研发计划(2022YFC2604204);; 国家生猪技术创新中心先导科技项目(NTCIP-XD/B11);; 温州市特派员专项(X2023085,N2023076);; 温州市农业丰收计划(FSJH2022003)