痘苗病毒蛋白D8纳米抗体的原核表达及结合活性分析

摘要

利用SUMO标签制备痘苗病毒(vaccinia virus, VACV)蛋白D8的纳米抗体，并分析其与抗原是否具有结合活性。设计并合成序列，构建原核表达质粒pKMD-SUMO-D8,将其转化大肠杆菌(Escherichia coli,E.coli)BL21(DE3)感受态细胞并诱导表达；纯化带有His标签和SUMO标签的抗体Anti-SUMO-D8,之后利用SUMO蛋白酶切除His标签和SUMO标签，进一步获得Anti-D8;最后，应用间接酶联免疫吸附试验(ELISA)及间接免疫荧光试验(IFA)对其结合活性进行检测并分析。结果显示，成功构建了原核表达质粒pKMD-SUMO-D8和重组菌株，在30℃条件下，终浓度为0.1 mmol/L的IPTG诱导表达菌株4 h时，Anti-SUMO-D8表达量最佳；获得了高纯度的Anti-SUMO-D8和Anti-D8纳米抗体；间接ELISA结果显示，Anti-SUMO-D8和Anti-D8与抗原均具有结合活性；在相同条件下，Anti-D8与VACV及E8L的结合活性高于Anti-SUMO-D8。间接IFA结果显示，VACV侵染48 h后，试验组部分细胞核在荧光显微镜下可见绿色荧光。利用SUMO标签可高效制备VACV蛋白D8的纳米抗体，且制备的纳米抗体具有一定的结合活性。本研究结果为纳米抗体的制备提供了新思路，也为深入研究VACV蛋白D8纳米抗体的生物学功能奠定了基础。

关键词

痘苗病毒 / 纳米抗体 / SUMO / 结合活性