党参皂苷对跨H9N2 AIV感染肺微血管内皮侵袭细胞功能的影响

摘要

为探讨党参皂苷对H9N2亚型禽流感病毒（avian influenza virus, AIV）感染引起机体免疫抑制的调控作用，首先应用不同质量浓度（5、10、20 mg/L）党参皂苷孵育大鼠肺微血管内皮细胞（rat pulmonary microvascular endothelial cells, RPMECs）,采用RT-PCR和流式细胞术检测PD-L1表达水平变化，并以ELISA试剂盒检测上清液中TNF-α、IFN-γ、IL-10含量及空斑法检测上清液中H9N2 AIV的滴度。然后利用8μm孔径Transwell板建立RPMECs和T细胞共培养体系，以模仿循环T细胞跨过微血管迁移到病毒感染部位的过程。在Transwell上室中培养RPMECs,用H9N2 AIV接种RPMECs, 1 h后加入含20 mg/L党参皂苷的培养基，36 h后加入T细胞。作用8 h后，收集下室中的T细胞，用流式细胞仪检测CD4⁺T细胞和CD8⁺T细胞的比例，用ELISA试剂盒检测上清液中IL-2、IFN-γ和Granzyme B的表达水平，流式细胞分选技术检测Perforin-1阳性T细胞的比例，MTT细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒检测T细胞的增殖活性，Annexin V-FITC/PI对T细胞染色后用流式细胞仪检测凋亡细胞的百分比。结果显示，党参皂苷可显著降低H9N2 AIV感染诱导的RPMECs中PD-L1的表达水平、IL-10及TNF-α表达量，降低T细胞凋亡率，但可显著提高跨内皮迁移T细胞中IL-2、IFN-γ、Perforin-1和Granzyme B的表达量及T细胞的增殖活性。结果表明，党参皂苷可显著抑制RPMECs中H9N2 AIV诱导的PD-L1的表达，增强跨内皮细胞层迁移T细胞的抗病毒功能，有利于增强宿主对H9N2 AIV抵抗能力。

关键词

党参皂苷 / 微血管内皮细胞 / PD-L1 / T细胞 / H9N2 AIV