1株牛阿卡斑病毒全基因组的测定分析及荧光定量PCR检测方法的建立

摘要

为了解贵州省阿卡斑病(Akabane disease, AKAD)流行情况及毒株的分子特征，本试验对一牛源AKAD阳性病料进行阿卡斑病毒(Akabane virus, AKAV)的全基因组测序，构建系统进化树，探究该毒株基因型和遗传变异情况，根据该毒株保守S序列建立其荧光定量PCR检测方法，并对该省4个规模化肉牛养殖场进行AKAV感染情况的调查。结果显示，该毒株S、M和L片段与中国天津株(TJ2016/China/2016)和澳大利亚株(JaLAB39/Australia/1959)高度同源，且均处于同一进化分支，为基因Ⅱ型；对所建立荧光定量PCR方法的灵敏性、特异性和重复性进行评估，显示其最低检出下限为2.5×10～1 copies/μL,对牛蓝舌病病毒(bovine bluetongue virus, BLUV)、多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida,PM)、牛传染性鼻气管炎病毒(bovine infectious rhinotracheitis virus, IBRV)和牛支原体(bovine Mycoplasma bovis)均未出现扩增，重复性试验的批间和批内变异系数均低于2.26%,说明所建方法灵敏性高、特异性好，具有良好的重复性和稳定性；利用该方法对贵州黔西市和黄平县4个规模化肉牛养殖场共298份血清样本进行检测，共发现25份阳性样本，阳性率8.39%。本试验结果为深入了解AKAV在贵州省的分子流行情况提供了数据参考，对AKAD的综合防控奠定了基础。

关键词

阿卡斑病毒 / 全基因组 / 荧光定量PCR / 牛 / 贵州省