小反刍兽疫病毒诱导的内质网应激对山羊肾细胞PERK信号通路和细胞凋亡的影响

摘要

病毒感染可引起宿主细胞产生内质网应激(endoplasmic reticulum stress, ERS)和未折叠蛋白反应(unfolded protein response, UPR),导致内质网稳态失衡。为了深入探讨小反刍兽疫病毒(peste des petits ruminants virus, PPRV)感染诱导的ERS对宿主细胞UPR信号通路、病毒复制和细胞凋亡的影响，采用MTT试验测定、间接免疫荧光试验(IFA)和Western blot观察PPRV在山羊肾细胞(LDG-2)的增殖，采用Western blot和实时荧光定量PCR(qRT-PCR)观察PPRV感染对GRP78、PERK及其下游信号分子、细胞凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax表达水平的影响。结果显示，PPRV感染36 h后，细胞存活率显著降低并产生明显细胞病变，PPRV-N蛋白表达水平呈上升趋势，且在病毒感染30 h后显著高于细胞对照；与此同时，GRP78、p-eIF2α和GADD153表达水平、p-PERK/PERK和p-eIF2α/eIF2α比值均显著升高。用4-PBA阻断PPRV诱导的ERS,PPRV感染细胞中PPRV-N蛋白、GRP78、p-eIF2α和GADD153表达水平及p-eIF2α/eIF2α、p-PERK/PERK比值均显著降低。在PPRV感染30和36 h,与细胞凋亡相关的Bcl-2表达下调，Bax表达上调，Bcl-2/Bax比值则显著降低。由此可见，PPRV感染可激活PERK/eIF2α/GADD153信号通路，缓解病毒诱导的ERS,促进病毒复制；阻断PPRV诱导的ERS,可抑制PERK信号通路和病毒复制；PPRV感染和持续的ERS可诱导宿主细胞凋亡。

关键词

小反刍兽疫病毒 / 内质网应激 / 信号通路 / 细胞凋亡