黏菌素体外诱导耐药对肠炎沙门菌的主要耐药机制

摘要

为了分析黏菌素体外诱导肠炎沙门菌耐药的主要耐药机制。本研究针对肠炎沙门菌CMCC(B)50335(ZK),通过体外诱导其对黏菌素耐药，并采用比浊法、半固体琼脂法、透射电镜、纸片扩散法测定诱导前后生长特性、运动能力、超微结构及对16种抗菌药物敏感性变化，Illumina NovaSeq PE150法检测其全基因组及单核苷酸多态性(SNP),RT-qPCR检测6种耐药相关基因表达量差异，Red大肠杆菌同源重组法构建诱导耐药株E1-128-1的phoP基因重组株△phoPE1-128-1,并检测对黏菌素的敏感性变化。结果表明，筛选出3株诱导耐药菌E1-128-1、E1-128-3、E2-128-3,耐药稳定性检测后最小抑菌浓度(minimal inhibit concentration, MIC)分别升高128、64、64倍；诱导耐药对受试菌生长能力及16种抗菌药物敏感性无显著性影响，E1-128-1运动能力显著升高，细胞壁及质膜明显增厚；诱导前后E1-128-1基因组组分无明显差异，但检测出phoP/phoQ、cpxP、lptD、csrA、acrB等6个耐药相关基因的8个错义突变，包括phoP错义突变位点4个，分别为Leu185Trp、His189Ser、Thr190Tyr和Ile191His,对相应基因进行PCR测序，结果与SNP结果相符；RT-qPCR结果表明3株诱导菌突变基因表达量均显著性上升；△phoPE1-128-1的黏菌素MIC值较E1-128-1下降至1 mg/L。提示phoP基因突变及表达量升高是体外诱导沙门菌CMCC(B)50335多黏菌素耐药的重要因素。

关键词

沙门菌 / 黏菌素 / 诱导耐药 / phoP / Red大肠杆菌同源重组