原核重组表达的鲍曼不动杆菌噬菌体裂解酶LysZHSHW的表征与抗菌活性

摘要

为评估能对抗鲍曼不动杆菌感染的噬菌体裂解酶LysZHSHW的体内外抗菌潜力和研究其特征。以表达质粒pET28a为骨架，使用PCR和酶切连接方法构建含有裂解酶LysZHSHW编码基因的pET28a-Lys重组质粒并在E.coli BL21(DE3)表达。通过Western blot方法验证裂解酶LysZHSHW的表达后，对其进行表征和体内外应用潜力的评估。pET28a-Lys重组质粒构建成功，LysZHSHW蛋白表达正确。经纯化的酶的质量浓度为4 086 mg/L,可用于后续试验。LysZHSHW的酶活性为630 U/μg,其在25℃,pH值为9.0时活性最强。在体外，1 000或750 mg/L的酶在EDTA的协助下能使细菌数量下降4.0个数量级，且无细胞毒性；在体内，酶联合EDTA作用，2.5μg的酶能使大蜡螟感染模型24 h后的存活率达92.86%,0.15 mg的酶能使小鼠大腿载菌量下降2.8个数量级，并减轻肌纤维间的炎性反应。由此，鲍曼不动杆菌噬菌体来源的LysZHSHW具有常温、弱碱、安全的特点，其作为新型抗菌剂具有应用前景。

关键词

鲍曼不动杆菌 / 裂解酶 / 异源表达 / 酶活性 / 抗菌活性