奎宁酸通过NF-κB与NLRP3炎性小体对牛乳腺细胞、小鼠乳腺炎性反应和细胞焦亡的抑制效应

摘要

奎宁酸(QA)具有抗氧化、抗癌和抗炎的作用，但其对牛乳腺炎的保护作用还有待进一步研究。旨在探究QA对脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)诱导的牛乳腺上皮细胞(MAC-T)、小鼠乳腺组织炎症与细胞焦亡的抑制作用及其机制。采用CCK-8法筛选QA处理MAC-T细胞的最佳质量浓度，ELISA法检测炎性因子、氧化应激因子以及细胞焦亡指示因子的表达水平；免疫组化法检测小鼠乳腺组织中CD3含量；Western blot检测NF-κB、NOD样受体3(NLRP3)炎症小体、Caspase-11和GSDMD(gasdermin D)的表达水平；免疫荧光检测核因子κB(NF-κB)关键蛋白p65核转移情况。结果表明，QA(20、40、60、80 mg/L)显著提高了MAC-T细胞活性(P<0.05)。QA处理显著降低了MAC-T细胞和小鼠乳腺中LPS诱导的炎性因子(TNF-α、IL-1β、IL-6)、氧化应激因子(COX-2、iNOS)以及细胞焦亡指示因子(ROS、LDH、IL-18)的表达水平，并具有剂量依赖性(P<0.05);小鼠腹腔注射QA(5、10、20 mg/kg)后LPS诱导的CD3的表达显著下调(P<0.05),小鼠乳腺组织T淋巴细胞浸润减少。QA显著抑制了MAC-T细胞和小鼠乳腺组织中LPS诱导的NF-κB(IκBα、p65、p-IκBα和p-p65)的表达水平、MAC-T细胞NF-κB核转移、NLRP3炎症小体(NLRP3、ASC、Caspase-1)、Caspase-11和GSDMD的蛋白表达水平(P<0.05)。上述结果表明，QA通过NF-κB和NLRP3炎症小体抑制MAC-T、小鼠乳腺炎性反应与细胞焦亡。本研究为植物活性成分防治乳腺炎提供了新的数据。

关键词

奎宁酸 / 乳腺炎症 / NF-κB / NLRP3炎性小体 / 细胞焦亡