稳定表达circLAMP3的C57/B6-L和A549细胞系的构建

摘要

旨在构建稳定过表达环状RNA LAMP3(circLAMP3)的C57/B6-L和A549细胞系，为后续深入研究circLAMP3的生物学功能奠定基础。分别提取C57/B6-L和A549细胞总RNA,反转录后扩增circLAMP3全长序列，连接到pLC5-ciR载体上，得到pLC5-Mouse-circLAMP3和pLC5-Human-circLAMP3重组质粒。利用瞬时转染方法在HEK293T细胞上包装慢病毒，将慢病毒分别感染C57/B6-L和A549细胞，经嘌呤霉素筛选得到稳定表达circLAMP3的细胞系。利用荧光显微镜、PCR扩增、荧光定量PCR(qPCR)和Sanger测序对构建的细胞系过表达circLAMP3效果进行验证。结果表明，pLC5-Mouse-circLAMP3和pLC5-Human-circLAMP3过表达质粒构建成功，荧光显微镜下可见构建的C57/B6-L和A549细胞系表达强烈绿色荧光。PCR和qPCR结果可见过表达细胞系circLAMP3表达显著增强，Sanger测序结果表明circLAMP3环化位点正确。本研究成功构建了过表达circLAMP3的C57/B6-L和A549细胞系，为进一步探索circLAMP3在流感病毒复制中的生物学功能提供了生物材料。

关键词

环状RNA / circLAMP3 / 载体构建 / 细胞系