基于猪伪狂犬病病毒gD蛋白间接ELISA方法的建立及其在免疫评估中的应用

摘要

以哺乳动物细胞HEK-293F表达猪伪狂犬病病毒(pseudorabies virus, PRV)gD重组蛋白作为包被抗原，采用棋盘滴定法优化确定出间接法gD-ELISA(gD-iELISA)各项技术参数；用gD-iELISA检测211份临床猪血清的抗体水平并分析与中和抗体水平的一致关系。结果显示，抗原包被质量浓度为0.90 mg/L;待检血清1∶100稀释，37℃孵育30 min;山羊抗猪IgG-HRP抗体1∶55 000稀释，37℃孵育30 min; TMB底物37℃显色20 min。gD-iELISA能检出1∶6 400稀释的PRV阳性血清；用gD-iELISA检测CSFV、PRRSV、PCV-2、PEDV和FMDV阳性血清其结果均呈阴性，该方法与以上阳性血清不存在交叉反应；gD-iELISA与商品试剂盒阴阳性血清的符合率为95.26%,批内和批间变异系数均低于10%。相关性分析表明，gD抗体水平与中和抗体效价的相关系数(r)显著大于gB抗体水平的相关性，并且gD抗体水平与中和抗体效价有很好的线性关系。结果表明，gD-iELISA比gB-iELISA更适用于PRV的疫苗免疫评估。因此，该方法在PRV的免疫防控中将会有很好的应用前景。

关键词

伪狂犬病病毒 / 间接ELISA / gD / 中和抗体