猪肺炎支原体TH-1株的分离鉴定及其传代致弱株的筛选

摘要

从河南省南阳市多家猪场无菌采集40份疑似猪肺炎支原体（Mycoplasma hyopneumoniae,Mhp）发病猪的肺脏和气管组织，通过病原分离培养、菌落观察、PCR鉴定并测序，共分离到6株Mhp。各分离株在固体培养基上呈现出圆形、边缘整齐、似露滴样中央有颗粒且隆起的菌落形态。PCR可以扩增到各个分离株P36目的基因条带，扩增产物测序后与NCBI中登录的ATCC 25934参考株（J株）P36基因序列比对，其同源性为99%以上。CCU试验测定TH-1株的生长滴度可达10¹¹ CCU/mL,具有较高的生长滴度。选择TH-1株进行体外高温（40℃）连续传代获取不同代次的传代株（P50、P100、P150）。其中，TH-1 P150代株在40℃生长温度下仍具有较高的生长滴度(10¹⁰ CCU/mL)。将TH-1 P1、P50、P100、P150经气管注射感染25日龄断奶仔猪，毒力评估结果显示：P1代感染组有4头猪肺脏（4/5）出现典型“肉样或虾肉样”病变，肺脏HE病理切片出现严重的单核细胞、淋巴细胞的浸润，气管扫描切片显示纤毛出现杂乱、缠绕、变短脱落病理变化；P150代感染组没有出现典型Mhp特征性病变，肺脏HE和气管扫描切片也没有出现微观病理变化，这表明TH-1是1株强毒力菌株，而对其经过不断的体外传代，其毒力不断下降，TH-1 P150株是1株低毒力菌株。TH-1 P150作为弱毒疫苗株具有较好的免疫原性，其免疫攻毒后的平均肺炎病变减少率为83.3%。结果表明，本试验采用体外高温连续传代的方法，获得了1株生长滴度高的低毒力菌株（TH-1 P150）,且其免疫原性较好，为进一步Mhp弱毒疫苗研发奠定了基础。

关键词

猪肺炎支原体 / 分离鉴定 / 体外传代 / 毒力