猪繁殖与呼吸综合征病毒MS2装甲病毒样颗粒质控品的制备及应用

摘要

为研制一种可以应用猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)实时荧光定量PCR(RT-qPCR)核酸检测的阳性质控品，本研究使用MS2噬菌体装甲RNA(Armored RNA)技术制备PRRSV-1和PRRSV-2 M基因的阳性质控品。将扩增的PRRSV-1和PRRSV-2 M基因进行纯化回收，连接到内含MS2成熟酶蛋白基因与衣壳蛋白的pET28b载体，通过转化至BL21(DE3)后，经IPTG诱导表达，利用PEG6000沉淀法纯化，制备出内含PRRSV M基因装甲RNA病毒样颗粒(AR-PRRSV)。后续进行性能评估，作为PRRSV-1和PRRSV-2 M基因的阳性质控品，AR-PRRSV1M和AR-PRRSV2M使用YY/T 1652-2019标准进行计算，数据表明均匀性良好，-20、4、25℃能稳定保存60 d, 37℃能稳定保存30 d。使用RT-qPCR进行初步定量后，利用数字定量PCR(ddPCR)对制备的装甲病毒样颗粒AR-PRRSV1M和AR-PRRSV2M进行定值，结果10～4拷贝/μL的AR-PRRSV1M和AR-PRRSV2M ddPCR定值均为(1.33±0.50)×10～4拷贝/μL。本研究结果表明，应用定值后的AR-PRRSVM,能够实现对检测全过程(核酸提取、反转录和RT-qPCR)的质量控制。

关键词

猪繁殖与呼吸综合征病毒 / 装甲RNA / 核酸检测 / 质控品