靶向伪狂犬病病毒UL35基因的SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR方法的建立

摘要

对伪狂犬病病毒(pseudorabies virus, PRV)感染后不同时间点UL35和gB基因的进行定量分析，发现在感染细胞后2.5、5.0以及20.0 h时，两者基因组拷贝数具有显著差异，并且在PRV感染早期可以观察到UL35基因的表达。为了确定UL35基因能否作为诊断PRV感染的靶标，本研究根据PRV不同毒株UL35基因保守序列，设计合成特异性荧光定量PCR引物，扩增长度为54 bp的片段。通过优化反应条件和反应体系，结果显示，建立的PRV SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测方法具有良好的重复性和特异性，其标准曲线与模板浓度呈现良好的线性关系；对猪繁殖和呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus, PRRSV)、猪瘟病毒(classical swine fever virus, CSFV)、非洲猪瘟病毒(African swine fever virus, ASFV)核酸扩增均呈阴性；将所建立的方法与同类方法进行比较，敏感性无差异；组间和组内重复性试验的变异系数小于2%。用本试验所建立的方法对PRV感染小鼠的组织样品进行检测，均检测到一定的病毒载量。结果表明，UL35基因可以作为诊断PRV感染的靶标。

关键词

伪狂犬病病毒 / UL35基因 / SYBR Green Ⅰ / 定量PCR