检测牛肠道病毒RT-RAA-LFD方法的建立与初步应用

摘要

本研究研发了一种基于重组酶介导核酸扩增(RAA)技术结合胶体金试纸条快速检测牛肠道病毒(BEV)的方法。以高度保守的BEV 5′UTR作为靶序列，设计出特异性引物，下游引物5′端标记生物素，探针5′端标记6-FAM,初步建立RT-RAA方法。将鼠源抗6-FAM单克隆抗体作为金标抗体，链霉亲和素包被于检测线，羊抗鼠IgG包被于质控线，组装试纸条。将RAA技术与制备的胶体金试纸条相结合，建立起检测牛肠道病毒的RT-RAA-LFD方法，并对该方法的特异性、敏感性与重复性及临床应用等方面进行了评价。结果显示，该方法最佳引物浓度为5μmol/L,在35℃反应8 min即可完成对BEV核酸的扩增；该方法最低检测限为10～1拷贝/μL,且与牛病毒性腹泻病毒、牛细小病毒、口蹄疫病毒均无交叉反应；制备的试纸条于4℃条件下，有效期至少为90 d; 74份临床样品检测结果显示，该方法与RT-PCR检测结果一致。上述结果表明，本研究建立的BEV RT-RAA-LFD方法灵敏度高、特异性强，且操作更加便捷，适用于临床现场检测，为BEV感染的诊断和流行病学调查提供了新的技术手段。

关键词

牛肠道病毒 / 5′UTR / RT-RAA-LFD / 胶体金试纸条