牛羊多杀性巴氏杆菌多重TaqMan qPCR检测方法的建立

摘要

为建立多杀性巴氏杆菌多重TaqMan荧光定量PCR检测方法，根据NCBI数据库中多杀性巴氏杆菌hyaC-hyaD、bcbD、dcbF、ecbJ、fcbD 5种荚膜基因序列设计特异性引物和荧光标记探针，通过梯度设置调整退火温度，用矩阵法对引物与探针浓度进行优化，构建标准曲线，进行特异性、灵敏度及重复性试验，最终建立针对这5种基因的多重TaqMan qPCR检测方法。结果显示，建立的检测方法其扩增曲线具有良好的线性关系；灵敏度较高，比普通PCR高10～100倍；特异性强，对芽孢杆菌、奇异变形杆菌、金黄色葡萄球菌、放射根瘤菌等8种病原菌DNA检测均无扩增曲线；组间及组内重复性试验Ct值变异系数均小于3%;通过对90份临床样本进行检测，显示该检测方法比常规PCR检测方法检出率高出11.25%。结果表明本研究建立的方法能够快速、高效地检测多杀性巴氏杆菌及其荚膜分型，对临床和实验室的快速诊断具有重要意义。

关键词

牛羊 / 多杀性巴氏杆菌 / 荚膜分型 / 多重TaqMan荧光定量PCR / 检测方法