稳定表达狂犬病病毒糖蛋白293T细胞系的构建及免疫原性研究

汪芋; 张守峰; 于婷婷; 米立娟; 么乃全; 缪发明; 扈荣良

doi:10.16303/j.cnki.1005-4545.2024.11.12

中国兽医学报 ›› 2024, Vol. 44 ›› Issue (11) : 2393 -2399. DOI: 10.16303/j.cnki.1005-4545.2024.11.12

稳定表达狂犬病病毒糖蛋白293T细胞系的构建及免疫原性研究

汪芋, 张守峰, 于婷婷, 米立娟, 么乃全, 缪发明, 扈荣良

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摘要

为得到可用于狂犬病亚单位疫苗生产的高效表达狂犬病病毒(rabies virus, RABV)糖蛋白的细胞系，本研究以RT-PCR扩增获得RABV糖蛋白基因序列并克隆入慢病毒表达载体中。重组质粒pLV-RVG与包膜质粒pMD2.0G及包装质粒psPAX2共转染HEK-293T细胞，收获慢病毒并感染新的HEK-293T细胞，通过嘌呤霉素加压筛选获得293T-RVG细胞系。将此细胞系传代20代，间接免疫荧光法(IFA)及Western blot鉴定表明67 kDa的RABV-G蛋白在该细胞内能够高效表达；且细胞系冻融物293T-RVG辅以佐剂肌肉注射免疫小鼠，血清以FAVN法测定RABV中和抗体，在免疫14 d体内效价就可达到2.19 IU/mL,高于国际公认保护阈值(0.5 IU/mL)。本研究成功构建了稳定且高效表达RABV糖蛋白的细胞系293T-RVG,该细胞系能够对攻毒小鼠产生保护作用，可作为一种亚单位疫苗，具备用于大规模生产和应用潜能。