日本脑炎病毒(JEV)感染睾丸间质细胞对TLRs信号通路的影响及其调控炎症因子的分泌

摘要

为了探究日本脑炎病毒(JEV)在感染睾丸间质细胞过程中对TLRs信号通路的影响及其调控炎症因子的分泌情况，本研究以1 MOI剂量的JEV接种睾丸间质细胞后，使用qPCR方法检测不同时间段TLR3、TLR7、TLR8、TRIF和MyD88基因的mRNA水平，Western blot方法检测JEV感染睾丸间质细胞6 h时TLR3、TLR7、TRIF和MyD88蛋白表达水平，ELISA检测不同时间段(6、12、24 h)IL-1β、IL-6和TNF-α的表达情况。结果显示：JEV感染睾丸间质细胞6 h后显著上调TLR3、TLR7、TRIF和MyD88基因mRNA水平(P<0.05),下调TLR8基因mRNA水平(P<0.05);Western blot结果显示，JEV感染睾丸间质细胞6 h时TLR3、TLR7、TRIF和MyD88蛋白表达均显著上调(P<0.05),与相应mRNA转录水平结果一致；TLR8蛋白表达变化不显著。ELISA检测结果显示，JEV感染睾丸间质细胞6 h后IL-6极显著增加(P<0.01),IL-1β和TNF-α表达无显著变化。利用siRNA分别对TLR3、TLR7、TLR8、TRIF和MyD88进行基因沉默，对沉默后的细胞接种JEV 6 h时取上清液ELISA检测IL-6表达水平。结果显示，沉默TLR3、TLR7、TLR8、TRIF和MyD88后均可显著减轻JEV感染引起的IL-6分泌增加(p<0.05),表明JEV感染睾丸间质细胞后可通过激活TLR3、TLR7和TLR8信号通路诱导炎症因子IL-6的表达。本研究为深入阐明JEV感染导致的繁殖障碍机制提供了参考。

关键词

日本脑炎病毒 / 睾丸间质细胞 / Toll样受体 / 炎症因子