猪圆环病毒3型Cap蛋白的高密度发酵工艺及免疫评价

摘要

为了实现猪圆环病毒3型(PCV3) Cap蛋白在重组大肠杆菌中的高效表达，在10 L发酵罐中考察溶氧(DO)控制策略、氧消耗速率(OUR)控制策略、DO和OUR联合控制策略对目的蛋白表达的影响；通过选择最佳的OUR控制范围确定重组大肠杆菌的高密度发酵工艺；对高密度发酵的蛋白进行SDS-PAGE、Western blot鉴定和免疫评价。结果表明：DO控制策略和OUR控制策略的目的蛋白表达量偏低，检测发现乙酸是影响目的蛋白表达量的主要因素，当乙酸质量浓度达到1.02 g/L时目的蛋白的表达量降低55.8%。DO和OUR联合控制策略在补料前以DO作为控制供氧的参数，在补料后以OUR作为控制供氧的参数，保持OUR值在每小时140～160 mmol/L,可以减少乙酸的生成，目的蛋白的表达量最高为650 mg/L。Western blot鉴定结果显示目的蛋白具有良好的反应原性和特异性。动物试验结果显示二免后抗体阳性率为100%,目的蛋白具有良好的免疫原性。说明DO和OUR联合控制的高密度发酵工艺可以实现PCV3 Cap蛋白在发酵罐上的高效可溶性表达，为进一步进行疫苗研制奠定了基础。

关键词

PCV3 Cap蛋白 / 乙酸 / DO和OUR联合控制 / 高密度发酵