非洲猪瘟病毒pp62蛋白在HEK 293F细胞中的表达及其诱导的免疫应答分析

摘要

非洲猪瘟（ASF）是由非洲猪瘟病毒（ASFV）引起的高度接触性传染病。为确定ASFV pp62（CP530R）蛋白的免疫原性，本研究利用真核表达重组质粒pMAL-Fc-CP530R转染HEK 293F细胞表达pp62重组蛋白，通过皮下注射免疫C57BL/6J小鼠，10μg/只，分别于0、21 d等剂量（加强）免疫1次，通过ELISA、IFN-γ ELISpot及流式细胞术等方法评价pp62重组蛋白在C57BL/6J小鼠体内的体液免疫及细胞免疫效果。SDS-PAGE结果显示，HEK 293F细胞表达重组蛋白大小约为118.5 kDa,与pp62蛋白预期大小一致；Western blot结果显示利用ASFV标准阳性血清可检测到特异性条带；ELISA结果表明，pp62重组蛋白一免后7 d即可刺激机体产生特异性抗体，二免后7 d抗体效价可达1∶1 638 400;IFN-γ ELISpot结果显示，pp62重组蛋白免疫C57BL/6J小鼠可产生IFN-γ,与PBS空白组相比差异显著（P<0.05）;流式细胞术检测结果显示，免疫小鼠脾淋巴细胞CD4⁺/CD8⁺ T细胞亚类比值显著高于PBS空白组（P<0.05）;Q-Plex^TM Mouse多因子检测结果显示，二免后免疫小鼠血清中IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-10分泌水平显著上调（P<0.001）。结果表明，pp62重组蛋白免疫可以激活机体产生较好的体液免疫与细胞免疫，从而为ASFV pp62蛋白功能研究及ASF新型疫苗抗原筛选提供参考。

关键词

非洲猪瘟病毒(ASFV) / 真核表达 / pp62蛋白 / 免疫应答