猪δ冠状病毒N蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

摘要

猪δ冠状病毒(porcine deltacoronavirus, PDCoV)是当前猪病毒性腹泻的重要病原之一，致使养猪业遭受经济损失。已知的病毒编码蛋白质中，核衣壳(nucleocaspid, N)蛋白相对保守，是冠状病毒的优势抗原，制备靶向该蛋白的抗体能够作为感染早期精准诊断的最佳候选方案。通过IPTG低温诱导原核表达重组PDCoV N蛋白，镍柱纯化后免疫6周龄BALB/c小鼠，眼眶静脉丛采血并分离血清；间接ELISA方法测定其效价高于1∶10 000时，摘取脾细胞与SP2/0细胞融合获得杂交瘤细胞，3次有限稀释后筛选分泌抗体效价最高的单克隆细胞株。最后，间接免疫荧光试验和Western blot分析抗体的反应性，并确定抗体重轻链的亚型。筛选1株针对PDCoV N蛋白的杂交瘤细胞株，分泌的单克隆抗体(monoclonal antibody, MAb)命名为2G12,测定其效价达1∶409 600。间接免疫荧光试验表明2G12能与PDCoV发生特异性结合；Western blot也证实2G12与感染细胞上清中PDCoV和重组表达N蛋白均反应良好，分泌MAb亚型经鉴定为IgG1,轻链为κ链。制备的抗PDCoV N蛋白MAb能为后续PDCoV诊断试剂盒开发提供技术支撑，也可以在PDCoV N蛋白功能研究中发挥重要作用。

关键词

猪δ冠状病毒 / N蛋白 / 单克隆抗体