猪轮状病毒RT-RAA-LFD快速诊断方法的建立及应用

摘要

为实现猪轮状病毒(porcine rotavirus, PoRV)的快速检测，本研究将重组酶聚合酶等温扩增(recombinase aided amplification, RAA)与侧流层析试纸条(lateral flow dipstick, LFD)技术结合，根据PoRV VP6基因保守序列，设计特异性引物和探针，构建并优化扩增体系，建立了基于RAA-LFD的PoRV一步法快速检测方法，并对检验该方法的特异性、敏感性、重复性及临床应用进行了评价。结果显示，该方法在37℃恒温反应15 min即可实现对PoRV核酸的扩增，最低检出限为22.3拷贝/μL,与其他常见病毒性腹泻病毒均无交叉反应，RT-RAA-LFD与RT-PCR检测方法总符合率为97.0%,Kappa系数为0.93(K>0.75)。本试验建立的RT-RAA-LFD检测方法具有良好的特异性、敏感性和稳定性，并具备快速、可视化和适合现场快检等特点，为PoRV快速诊断和流行病学调查提供了新的技术手段。

关键词

猪轮状病毒 / 重组酶聚合酶等温扩增 / 侧流层析试纸条 / 检测方法