BTV16重组VP2蛋白原核表达、多克隆抗体制备及间接ELISA检测方法的建立与初步应用

摘要

蓝舌病毒(BTV)是我国法定的多种动物共患的二类动物疫病，对反刍动物养殖业的危害极大，BTV共有29个血清型，BTV16是我国目前流行的主要血清型之一。BTV感染后主要表现为隐性感染，因此建立ELISA检测方法对流行病学的检测极为重要。本研究通过原核表达系统进行BTV16 VP2蛋白的表达，使用BALB/c小鼠进行多克隆抗体的制备。建立并优化了以VP2蛋白为包被抗原的间接ELISA检测方法。对广西壮族自治区临床样品进行检测，并与商品化试剂盒进行符合率分析。结果表明，成功表达并纯化出BTV16 VP2蛋白，制备的多克隆抗体具有良好的免疫原性。ELISA检测方法具有良好的特异性，对赤羽病病毒(AKAV)、口蹄疫病毒(FMDV)和盖塔病毒(GETV)等反刍动物疫病无交叉反应，阴、阳性的临界值为0.314,批间和批内的变异系数(Cv)均小于5%,具有良好的重复性，对79份广西壮族自治区的样品进行检测，阳性率为92.4%,与商品化试剂盒比较符合率为98.7%。本研究成功建立了一种BTV16间接ELISA检测方法，用于牛临床样品的检测。

关键词

原核表达 / 多克隆抗体 / 间接ELISA / BTV