空肠弯曲菌RPA-LFD快速检测方法的建立及评价

摘要

为建立特异、快速、便捷的空肠弯曲菌(Campylobacter jejuni,C.jejuni)检测方法，以空肠弯曲菌的hip0基因为靶标，设计了1组特异性引物及1条探针，下游引物和探针的5′端分别标记生物素、荧光素，通过对反应时间及温度的优化，建立了C.jejuni-RPA-LFD检测方法，并对其进行了灵敏度评估及模拟样本检测。结果显示，C.jejuni-RPA-LFD与肺炎克雷伯菌、大肠杆菌、假单胞菌、蜡样芽胞杆菌、巴氏杆菌、奇异变形杆菌、鼠伤寒沙门菌无交叉反应，最佳反应体系为37℃、25 min,其灵敏度可达3.93×10～0拷贝/μL,模拟检测中，可检测出1×10～2 CFU/mL的空肠弯曲菌污染粪便样本。结果表明，建立的C.jejuni-RPA-LFD具有特异性好、简便、快速、灵敏度高等优点，为畜禽养殖业基层现场、快速诊断空肠弯曲菌及控制其传播提供有效途径。

关键词

空肠弯曲菌 / RPA-LFD / hipO基因