牛TXNIP基因的过表达载体构建及对乳腺上皮细胞增殖和凋亡的影响

摘要

为探究硫氧还蛋白相互作用蛋白(TXNIP)基因对牛乳腺上皮细胞增殖和凋亡的调控作用，本试验采用同源重组的方法构建了牛TXNIP基因过表达载体，通过酶切和测序进行鉴定，对得到的序列进行BLAST比对和系统进化分析；将TXNIP过表达质粒转染至牛乳腺上皮细胞，采用CCK-8和EdU检测细胞增殖、Annexin V-mCherry检测细胞凋亡水平，通过RT-qPCR检测细胞中凋亡相关基因mRNA的表达变化。结果表明，牛TXNIP基因CDS区1 176 bp,编码391个氨基酸，与羊的亲缘关系最近。与对照组相比，牛TXNIP基因过表达降低了乳腺上皮细胞活力，使细胞增殖数减少，促进细胞凋亡。过表达TXNIP基因导致牛乳腺上皮细胞中的凋亡相关基因Caspase-3、Caspase-9、Bax表达量显著上调(P<0.05),Caspase-8基因表达量无显著变化(P>0.05),抗凋亡基因Bcl-2表达极显著下调(P<0.01)、Bax/Bcl-2比值极显著升高(P<0.01)。结果表明，TXNIP基因可以抑制牛乳腺上皮细胞增殖，促进细胞凋亡，调控凋亡相关基因的表达，进而影响牛的乳腺发育。

关键词

TXNIP基因 / 过表达重组质粒 / 乳腺上皮细胞 / 细胞增殖 / 细胞凋亡 / 牛