嵌合CTB和WPRE PEDV病毒样颗粒的构建及免疫原性分析

摘要

霍乱毒素B亚基(cholera toxin B subunit, CTB)可增强抗原呈递并促进T细胞增殖、B细胞分化和B细胞同种型转换；土拨鼠肝炎病毒转录后调控元件(woodchuck hepatitis virus post transcriptional regulatory element, WPRE)可通过优化RNA多聚腺苷酸化、出核和/或翻译增强基因表达效率。为构建嵌合CTB和WPRE的猪流行性腹泻病毒样颗粒(VLPs)并评价其免疫原性，本研究以GⅡ型PEDV S基因为基础，添加几种可以提高蛋白表达量和增强免疫效果的元件，命名该基因为TSCW,将TSCW经公司合成后克隆至pET32a(+),双酶切并胶回收后克隆至pFastBac1,构建重组质粒pFastBac-TSCW,进一步转化DH10Bac感受态细胞以获得重组杆粒Bacmid-TSCW,用Bacmid-TSCW转染sf9细胞获得重组杆状病毒BV-TSCW,将BV-TSCW与BV-M共感染sf9细胞获得病毒样颗粒VLP-TSCW,用其免疫小鼠评价其免疫原性。结果显示，成功构建重组质粒pFastBac-TSCW;PCR鉴定结果表明，重组杆粒Bacmid-TSCW构建成功；重组杆状病毒转染sf9细胞后可出现明显细胞病变；PCR和Western blot结果显示，重组杆状病毒可稳定存在于sf9细胞中，且目的蛋白也能稳定表达；电镜结果显示，BV-TSCW和BV-M成功组装成病毒样颗粒VLP-TSCW;ELISA结果表明，VLP-TSCW可诱导小鼠产生较高水平的特异性抗体。本研究结果将为后续继续开展PEDV VLPs亚单位疫苗优化、设计和研发奠定基础。

关键词

猪流行性腹泻 / 病毒样颗粒 / 霍乱毒素B亚单位 / 土拨鼠肝炎病毒转录后调控元件